UV紫外光度計是常用的分析儀器，廣泛應用于化學分析、環境監測、食品檢測、生物醫藥等領域。它通過測量樣品吸收特定波長的紫外光來確定樣品中某一物質的濃度。盡管紫外光度計具有高精度和高靈敏度，但在使用過程中仍然有許多需要注意的事項，以確保測試結果的準確性和可靠性。
1.儀器的校準與調試
在使用紫外光度計之前，必須確保儀器已經過校準。校準是確保儀器測量準確的基礎，通常包括波長校準和光度校準兩部分。波長校準是通過使用已知吸收峰的標準物質來確保光源的波長準確；而光度校準則需要使用標準溶液進行，以保證儀器的光強和測量結果的準確性。此外，儀器的調試和狀態檢查也是必要的，如檢查光源的穩定性、檢查探測器的靈敏度等。
2.樣品的準備
樣品的準備對分析結果有著至關重要的影響。首先，樣品的濃度應當適當，不應過高或過低。濃度過高會導致紫外光的吸收過強，導致儀器超出其測量范圍；而濃度過低則可能導致吸光度過小，影響測量的準確性。因此，在準備樣品時，應根據標準曲線的范圍調整樣品濃度。其次，溶劑的選擇也非常重要。紫外光度計主要測量樣品對紫外光的吸收，因此溶劑本身的吸光度應盡量低，避免對測量結果造成干擾。常用的溶劑如水、乙醇等，均需經過選擇和驗證。
3.使用合適的比色皿
比色皿是紫外光度計中用于容納樣品溶液的器皿，其材質、形狀和清潔程度都會對測量結果產生影響。常見的比色皿材質包括玻璃和石英，其中石英皿對紫外光的透過率較高，適用于波長范圍為200nm至400nm的測量，而玻璃比色皿則一般只能用于波長大于320nm的測量。比色皿在使用前必須保持干凈，任何污垢或劃痕都可能影響光的透過量，從而影響結果的準確性。此外，應注意比色皿的路徑長度（通常為1cm），這個長度是計算濃度時必須考慮的因素之一。
4.波長的選擇與掃描
UV紫外光度計的核心是光源發出的紫外光，因此選擇合適的波長對結果至關重要。不同物質在不同波長下的吸收峰不同，選擇適當的波長可以測量靈敏度。通常，使用已知標準物質進行吸光度掃描，確定物質在特定波長下的最大吸收值（即λmax）。在進行樣品分析時，應選擇與樣品中目標物質的吸收峰相匹配的波長進行測試。如果需要分析多個物質或復雜樣品，可以通過掃描不同波長來獲得吸收譜圖，進一步分析。
5.執行標準曲線法
UV紫外光度法通常通過標準曲線法來確定樣品中目標物質的濃度。標準曲線的繪制需要選取多種已知濃度的標準溶液，并在同一條件下測量其吸光度。得到一系列濃度與吸光度的對應關系后，通過線性回歸分析繪制出標準曲線。在實際測量過程中，根據樣品的吸光度可以通過標準曲線計算出其濃度。在測量時要確保樣品的吸光度在標準曲線的有效范圍內，避免濃度過高或過低。
6.儀器的維護與保養
為了確保紫外光度計長期穩定運行，儀器的日常維護和保養也十分重要。定期清潔光學元件，特別是光源和檢測器，以防止灰塵和雜質影響光的傳輸和檢測。每次使用后，應關閉儀器，防止長時間處于開啟狀態導致過度耗損。同時，定期檢查光源的工作狀態，如燈泡的更換、校準等，確保儀器性能的穩定。
7.數據的處理與分析
UV紫外光度計提供的數據通常為吸光度值，實驗者需要通過數學方法進行數據分析。常用的分析方法包括線性回歸、比色法計算等。在數據處理時，實驗者應考慮可能的誤差來源，如溶液的均勻性、比色皿的放置誤差、儀器的漂移等，并盡量消除或修正這些誤差。此外，對于重復性差的實驗結果，應及時檢查實驗條件，分析可能的原因。
