分光光度計采用一個可以產生多個波長的光源，通過系列分光裝置，從而產生特定波長的光源，光源透過測試的樣品后，部分光源被吸收，計算樣品的吸光值，從而轉化成樣品的濃度。樣品的吸光值與樣品的濃度成正比。
分光光度計使用與維護：
1）若大幅度改變測試波長，需稍等片刻，等燈熱平衡后，重新校正“0”和“100%”點。然后再測量。
2）指針式儀器在未接通電源時，電表的指針必須位于零刻度上。若不是這種情況，需進行機械調零。
3）比色皿使用完畢后，請立即用蒸餾水沖洗干凈，并用干凈柔軟的紗布將水跡擦去，以防止表面光潔度被破壞，影響比色皿的透光率。
4）操作人員不應輕易動燈泡及反光鏡燈，以免影響光效率。
5）分光光度計由于其光電接收裝置為光電倍增管，它本身的特點是放大倍數大，因而可以用于檢測微弱光電信號，而不能用來檢測強光。否則容易產生信號漂移，靈敏度下降。針對其上述特點，在維修、使用此類儀器時應注意不讓光電倍增管長時間暴露于光下，因此在預熱時，應打開比色皿蓋或使用擋光桿，避免長時間照射使其性能漂移而導致工作不穩。
6）放大器靈敏度換擋后，必須重新調零。
7）比色杯的配套性問題。比色杯必須配套使用，否則將使測試結果失去意義。在進行每次測試前均應進行比較。具體方法如下；分別向被測的兩只杯子里注入同樣的溶液，把儀器置于某一波長處，石英比色杯；220nm、700nm裝蒸餾水，玻璃比色杯：700nm處裝蒸餾水，將某一個池的透射比值調至100%，測量其他各池的透射比值，記錄其示值之差及通光方向，如透射比之差在±0.5%的范圍內則可以配套使用，若超出此范圍應考慮其對測試結果的影響。
分光光度計采用分光光度法，主要是利用被測物質對某種波長的光具有選擇性吸收的特性建立起來的，分光光度法是目前鑒別物質或測定其含量的一種常用方法。
